AVALIAÇÃO DO POLIMORFISMO DA PROTEASE GP63 NUMA POPULAÇÃO DE Leishmania Viannia braziliensis CAUSADORA DE LEISHMANIOSE TEGUMENTAR AMERICANA - Dissertação de Mestrado 2014
Introdução: A Leishmania (Viannia) braziliensis é a principal causa da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) no Brasil. Na Bahia a L. (V.) braziliensis causa as três formas clínicas de leishmaniose: leishmaniose cutânea (LC), leishmaniose mucosa (LM) e leishmaniose disseminada (LD). Corte de Pedra (CP) na Bahia é uma área endêmica para a LTA, na qual encontramos as três formas clínicas. A leishmanolisina, ou GP63, é uma importante protease da superfície da leishmania capaz de hidrolisar uma grande variedade de substratos tanto no parasita quanto no hospedeiro. Seus produtos estão envolvidos na adesão e internalização desses parasitas nos macrófagos do hospedeiro e tem sido relacionada com a resistência do parasita à lise pelo sistema complemento e o aumento da virulência da L. (V.) braziliensis. Objetivo. Avaliar o polimorfismo do gene codificador da glicoproteína GP63 da L.(V.) braziliensis de Corte de Pedra – BA, e sua associação aos fenótipos de LC, LM e LD da LTA. Métodos. É um estudo de corte transversal, onde descrevemos os alelos de GP63 detectáveis na área endêmica para LTA de Corte de Pedra- BA entre 1992 e 2001. Isolados de L. (V.) braziliensis de pacientes com LTA, foram obtidos para a extração do DNA. Os loci do GP63 foram amplificados por PCR dessas amostras, os fragmentos de DNA obtidos nestas amplificações foram clonados em plasmídio com quatro e10 clones por isolado de L.(V.) braziliensis foram seqüenciados. Baseado nas seqüências obtidas, os alelos dos loci presentes em cada isolado foram determinados. Resultados. A identificação de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) nos 35 isolados analisados nos permitiu separar a população de L. (V.) braziliensis de acordo com alelos da gp63. No total foram encontrados 31 alelos, todos localizados no CHR10. Foram observadas mutações com troca de nucleotídeos que resultaram em mutações em regiões da proteina.Sete a cinquenta e uma posições no peptídeo apresentaram trocas de aminoácidos de acordo com o alelo da gp63. Quatro regiões altamente conservadas (PAVGNIPA,SRYD,HEMAH e KAREQYGC) também foram encontradas, na proteina traduzida. Estas regiões são consideradas importantes para a adesão e inetrnalização do parasita. Conclusão. A GP63 apresentou regiões muito polimórficas, contudo,regiões da proteína envolvidas na sobrevivência do parasita apresentam-se conservadas, sugerindo que possam ser alvos promissores ao emprego em reagentes de imunoprofilaxia contra a leishmaniose. Todos os alelos encontrados nos isolados estão no CHR10 e não foi encontrada nehuma associação estatística entre as formas clínicas da LTA e os alelos da gp63 encontrados nos isolados de Corte de Pedra-BA.